Proteinkonzentrationsrechner

Die Proteinkonzentration wird häufig durch UV-Absorbanz oder einen kolorimetrischen Assay im Vergleich mit bekannten Standards bestimmt. Die A280-Messung nutzt die Absorption aromatischer Aminosäuren, insbesondere Tryptophan und Tyrosin. Liegt ein massenspezifischer Extinktionskoeffizient in Millilitern pro Milligramm pro Zentimeter vor, liefert das Lambert-Beer-Gesetz die Konzentration in Milligramm pro Milliliter: Die blindwertkorrigierte Absorbanz wird durch Koeffizient und optische Weglänge geteilt. Anschließend wird das Ergebnis mit dem Verdünnungsfaktor multipliziert. Bradford-, Bicinchoninsäure- und Lowry-Assays erzeugen eine Färbung, deren Absorbanz mit der Proteinmenge variiert. Dafür ist eine unter denselben Bedingungen wie die unbekannten Proben gemessene Kalibrierkurve nötig. Dieser Rechner verwendet eine lineare Gleichung: Absorbanz gleich Steigung mal Konzentration plus Achsenabschnitt. Nach Umstellen wird der Achsenabschnitt abgezogen, durch die Steigung geteilt und der Verdünnungsfaktor angewendet. Geben Sie Steigung und Achsenabschnitt Ihrer Regression in Einheiten ein, die eine Konzentration in Milligramm pro Milliliter ergeben. Bei Standards in anderen Konzentrationseinheiten müssen Ergebnis oder Kalibrierwerte einheitlich umgerechnet werden. Eine verlässliche Quantifizierung hängt von der experimentellen Qualität ab, nicht allein vom Rechnen. Führen Sie den Blindwertabgleich mit demselben Puffer und denselben Reagenzien durch, verwenden Sie saubere, geeignete Küvetten oder Platten und messen Sie im validierten Bereich des Assays. Trübung, Nukleinsäuren, Detergenzien, Reduktionsmittel, Chelatoren, Lipide und stark absorbierende Pufferbestandteile können Ergebnisse verfälschen. Auch die Farbreaktion unterscheidet sich zwischen Proteinen. Ein ähnliches Standardprotein verbessert meist die Vergleichbarkeit; Wiederholungsmessungen von Standards und Proben zeigen Pipettier- oder Geräteschwankungen. Die Weglänge in Mikrotiterplatten beträgt meist nicht einen Zentimeter, sofern das Lesegerät sie nicht korrigiert. Verwenden Sie für A280 deshalb die effektive oder korrigierte Weglänge. Der Extinktionskoeffizient muss zu Protein, Wellenlänge und Definition passen; ein molarer Koeffizient darf nicht direkt in ein Feld für einen massenspezifischen Koeffizienten eingetragen werden. Prüfen Sie Residuen und vermeiden Sie weite Extrapolationen über die Kalibrierkurve hinaus. Verdünnen Sie konzentrierte Proben und messen Sie erneut, statt Absorbanzwerten außerhalb des linearen Bereichs zu vertrauen. Dieses Werkzeug führt die angegebene Berechnung aus, prüft aber weder Probenvorbereitung noch Kalibrierqualität, Assay-Kompatibilität oder Geräteleistung. Dokumentieren Sie Rohwerte, Blindwerte, Standards, Verdünnungsschritte und Einheiten, damit die angegebene Konzentration rückverfolgbar bleibt.