DNA-Konzentrationsrechner

Berechnen Sie Nukleinsäurekonzentration und Gesamtmasse aus A260-Absorbanz, Verdünnung und Volumen.

Nukleinsäurekonzentration berechnen

Wählen Sie den Nukleinsäuretyp und geben Sie den Messwert des Spektrophotometers sowie die Probendaten ein.

Nukleinsäuretyp

Absorbanz bei 260 nm (A260)

Verdünnungsfaktor

Probenvolumen (µL)

Über die Messung der DNA-Konzentration

Nukleinsäuren absorbieren wegen ihrer aromatischen Basen stark ultraviolettes Licht nahe 260 Nanometern. Ein Spektrophotometer misst diese Absorbanz; das Lambert-Beersche Gesetz verknüpft sie mit der Konzentration. Dieser Rechner verwendet die üblichen Laborfaktoren für doppelsträngige DNA, einzelsträngige DNA und RNA. Anschließend multipliziert er mit Verdünnungsfaktor und Probenvolumen, um Konzentration und gesamte zurückgewonnene Masse anzugeben. Ein A260-Wert von 1.0 wird üblicherweise als 50 Mikrogramm pro Milliliter für doppelsträngige DNA, 33 Mikrogramm pro Milliliter für einzelsträngige DNA oder 40 Mikrogramm pro Milliliter für RNA angesetzt. Mikrogramm pro Milliliter und Nanogramm pro Mikroliter haben denselben Zahlenwert; eine zusätzliche Skalierung ist nicht nötig. Bei verdünnten Messproben wird mit dem Verdünnungsfaktor multipliziert. Eine zehnfach verdünnte doppelsträngige DNA-Probe mit A260 von 0.5 hat daher ursprünglich 250 Nanogramm pro Mikroliter. Genaue Ergebnisse setzen einen korrekten Blindwertabgleich, eine saubere optische Oberfläche und einen Messwert im linearen Gerätebereich voraus. Verwenden Sie denselben Puffer wie für die Probe als Blindwert, da Salze, pH und andere Bestandteile die Basislinie beeinflussen können. Mischen Sie vorsichtig und vermeiden Sie Blasen. Bei zu hoher Absorbanz verdünnen Sie die Probe, messen erneut und geben den vollständigen Verdünnungsfaktor ein. Dieser ist die ursprüngliche Konzentration geteilt durch die gemessene; unverdünnt beträgt er eins. A260 allein belegt keine Reinheit. Proteine, Phenol, Guanidinium, freie Nukleotide und Trübung können zur UV-Messung beitragen. Labore prüfen häufig die Verhältnisse A260 zu A280 und A260 zu A230 als grobe Reinheitsindikatoren. Fluoreszenzfarbstoff-Assays können bei niedrigen DNA-Konzentrationen oder möglichen Verunreinigungen spezifischer sein. Auch der Umrechnungsfaktor ist eine Näherung; ungewöhnliche Oligonukleotidsequenzen können sequenzspezifische Extinktionskoeffizienten erfordern. Nutzen Sie die Gesamtmasse zur Berechnung der Ausbeute, Planung einer Normalisierung oder Bestimmung der für Folgearbeiten verfügbaren Menge. Sie ist Konzentration mal Probenvolumen und setzt eine homogene Probe voraus. Vor empfindlichen Anwendungen wie Sequenzierung, Klonierung, Transfektion oder quantitativer PCR sollten Sie die Assay-Anforderungen beachten und eine Konzentrationsbestätigung mit einem unabhängigen Messprinzip erwägen. Das Werkzeug unterstützt schnelle Planung und nachvollziehbare Rechnungen; Gerätequalität und Probenvorbereitung bleiben für zuverlässige Quantifizierung wesentlich.

Beispiele zur DNA-Konzentration

Durchgerechnete Absorbanzbeispiele mit Standard-Umrechnungsfaktoren.

Probe	Berechnetes Ergebnis	Methode
dsDNA, A260 0.5, Verdünnung 10, Volumen 20 µL	250 ng/µL; insgesamt 5,000 ng	Verwendet den dsDNA-Faktor 50.
RNA, A260 0.8, Verdünnung 2, Volumen 50 µL	64 ng/µL; insgesamt 3,200 ng	Verwendet den RNA-Faktor 40.
ssDNA, A260 0.3, Verdünnung 5, Volumen 30 µL	49.5 ng/µL; insgesamt 1,485 ng	Verwendet den ssDNA-Faktor 33.

So berechnen Sie die DNA-Konzentration

Wählen Sie doppelsträngige DNA, einzelsträngige DNA oder RNA.
Geben Sie die blindwertkorrigierte Absorbanz bei 260 Nanometern ein.
Geben Sie Verdünnungsfaktor und ursprüngliches Probenvolumen in Mikrolitern ein.
Klicken Sie auf Konzentration berechnen, um Konzentration und Gesamtmasse zu sehen.

Häufige Fragen zur DNA-Konzentration

Warum verwenden DNA und RNA unterschiedliche A260-Faktoren?

Struktur und mittleres Extinktionsverhalten unterscheiden sich, sodass gleiche Absorbanz nicht gleiche Massenkonzentration bedeutet. Die üblichen Faktoren nähern diese Unterschiede für Routinemessungen an.

Welchen Verdünnungsfaktor soll ich eingeben?

Geben Sie an, wie viel konzentrierter die ursprüngliche Probe gegenüber der Messlösung ist. Ein Teil Probe mit neun Teilen Puffer ergibt eine zehnfache Verdünnung; geben Sie 10 ein.

Haben ng/µL und µg/mL denselben Zahlenwert?

Ja, Zähler und Nenner ändern sich beide um den Faktor tausend. Ein Ergebnis von 50 ng/µL entspricht daher auch 50 µg/mL.

Kann A260 DNA von RNA unterscheiden?

Nein, beide absorbieren nahe 260 Nanometern, und Verunreinigungen können ebenfalls beitragen. Bei wichtiger Zusammensetzung verwenden Sie Reinigungskontrollen oder einen selektiven Fluoreszenz-Assay.

Was tun, wenn der Messwert außerhalb des linearen Bereichs liegt?

Verdünnen Sie die Probe bis in den validierten Absorbanzbereich und messen Sie erneut. Geben Sie den gesamten Verdünnungsfaktor an, damit der Rechner die Ausgangskonzentration ermittelt.