qPCR效率計算機

定量PCR效率描述目標DNA在每個擴增循環中的累積程度。通常將Cq或Ct值相對於起始模板濃度的以10為底對數作圖，建立標準曲線來估算。本計算機依據稀釋倍數、循環差與擴增倍數之間的標準關係，將擬合直線的負斜率換算為效率百分比。斜率接近負3.322時，擴增倍數為二，效率約為100%，表示理想情況下目標量在每個循環都會加倍。 許多qPCR工作流程認為90%至110%的效率大致可接受，對應斜率約為負3.58至負3.10。但允收標準仍應遵循實驗室已驗證的方法、檢測目的、儀器指引及適用的報告規範。單憑效率不足以確認檢測可靠。標準曲線也應涵蓋工作濃度範圍、包含足夠的技術重複，並呈現良好線性，殘差不應顯示系統性彎曲。 效率不佳可能源於引子錯配、引子設計不良、二級結構、退火條件不理想、抑制物、稀釋不準確、移液誤差，或濃度範圍超出檢測的線性響應。效率高於110%通常表示非特異性擴增、引子二聚體、基線或閾值問題，或系列稀釋誤差，而非真正的超高效率複製。在接受數值結果前，應檢視擴增曲線，並在適用時檢視熔解曲線。 請使用與此處座標定義相同的迴歸斜率：縱軸為Cq，橫軸為起始量的log10。交換座標軸或使用自然對數所得到的斜率不適用於此公式。請保留擬合斜率足夠的有效位數，因為四捨五入可能改變報告的效率。輸出僅是數學換算，不能取代標準曲線相關性、重複間變異、無模板對照、動態範圍及檢測特異性的檢查。