Калькулятор концентрации белка

Концентрацию белка обычно оценивают по поглощению ультрафиолета или колориметрическим методом в сравнении с известными стандартами. Измерение A280 использует поглощение ароматических аминокислот, прежде всего триптофана и тирозина. Если массовый коэффициент экстинкции задан в миллилитрах на миллиграмм на сантиметр, закон Бугера — Ламберта — Бера даёт концентрацию в миллиграммах на миллилитр: оптическую плотность с поправкой на холостую пробу делят на коэффициент и длину оптического пути. Затем результат умножают на коэффициент разведения. Методы Брэдфорда, бицинхониновой кислоты и Лоури создают окраску, оптическая плотность которой зависит от количества белка. Для них нужна калибровочная кривая, измеренная в тех же условиях, что и неизвестные пробы. Калькулятор использует линейное уравнение: оптическая плотность равна произведению наклона на концентрацию плюс свободный член. Для расчёта концентрации он вычитает свободный член, делит на наклон и учитывает разведение. Вводите параметры регрессии в единицах, дающих концентрацию в миллиграммах на миллилитр. Если стандарты приготовлены в других единицах, согласованно пересчитайте результат или калибровочные параметры. Надёжность количественного анализа зависит не только от арифметики, но и от качества эксперимента. Используйте для холостой пробы тот же буфер и реагенты, чистые совместимые кюветы или планшеты и работайте в проверенном диапазоне метода. Мутность, нуклеиновые кислоты, детергенты, восстановители, хелаторы, липиды и сильно поглощающие компоненты буфера могут искажать результат. Отклик в колориметрии также различается у разных белков. Стандарт, похожий на неизвестную пробу, обычно улучшает сопоставимость, а повторы стандартов и проб выявляют вариации дозирования и прибора. Длина оптического пути в микропланшете обычно не равна одному сантиметру, если ридер не выполняет коррекцию. Для A280 используйте эффективную или скорректированную длину пути прибора. Коэффициент экстинкции должен соответствовать белку, длине волны и принятому определению; молярный коэффициент нельзя напрямую вводить в поле массового. Оценивайте остатки регрессии и избегайте далёкой экстраполяции за калибровочную кривую. Концентрированные пробы лучше развести и измерить повторно, чем доверять значениям вне линейного диапазона. Инструмент выполняет указанный расчёт, но не проверяет подготовку проб, качество калибровки, совместимость анализа или работу прибора. Записывайте исходные показания, холостые пробы, стандарты, этапы разведения и единицы, чтобы обеспечить прослеживаемость результата.