Calculadora de concentração de DNA

Os ácidos nucleicos absorvem fortemente luz ultravioleta perto de 260 nanômetros devido às suas bases aromáticas. Um espectrofotômetro mede essa absorbância, e a lei de Beer-Lambert a relaciona com a concentração. Esta calculadora aplica os fatores de conversão convencionais de laboratório para DNA de fita dupla, DNA de fita simples e RNA. Depois multiplica pelo fator de diluição e pelo volume para informar a concentração e a massa total recuperada. Por convenção, A260 de 1.0 corresponde a 50 microgramas por mililitro de DNA de fita dupla, 33 microgramas por mililitro de DNA de fita simples ou 40 microgramas por mililitro de RNA. Microgramas por mililitro e nanogramas por microlitro têm o mesmo valor numérico, dispensando uma conversão adicional de escala. Para leituras diluídas, multiplique pelo fator de diluição. Assim, uma amostra de DNA de fita dupla com A260 de 0.5 após diluição de dez vezes tem concentração original de 250 nanogramas por microlitro. Resultados exatos dependem de um branco correto, superfície óptica limpa e leitura dentro da faixa linear do instrumento. Use como branco o mesmo tampão da amostra, pois sais, pH e outros componentes podem afetar a linha de base. Misture suavemente e evite bolhas. Se a absorbância estiver alta demais, dilua, meça novamente e informe o fator completo. Esse fator é a concentração original dividida pela medida; uma amostra sem diluição tem fator um. A260 sozinha não comprova pureza. Proteínas, fenol, guanidínio, nucleotídeos livres e turbidez podem contribuir para a leitura ultravioleta. Laboratórios costumam avaliar as razões A260 para A280 e A260 para A230 como indicadores gerais de pureza. Ensaios com corantes fluorescentes podem oferecer maior especificidade quando a concentração de DNA é baixa ou há suspeita de contaminantes. O fator de conversão também é aproximado, e sequências incomuns de oligonucleotídeos podem exigir coeficientes de extinção específicos. Use a massa total para calcular recuperação, planejar normalização ou determinar quanto material está disponível para etapas posteriores. Ela é simplesmente a concentração multiplicada pelo volume, pressupondo uma amostra homogênea. Antes de aplicações sensíveis como sequenciamento, clonagem, transfecção ou PCR quantitativa, siga os requisitos do ensaio e considere confirmar a concentração com um método de princípio independente. Esta ferramenta permite planejamento rápido e cálculos transparentes, mas a qualidade do instrumento e o preparo da amostra continuam essenciais para uma quantificação confiável.