Calculadora de concentração de proteínas

A concentração de proteínas costuma ser estimada por absorbância ultravioleta ou por um ensaio colorimétrico comparado com padrões conhecidos. A medição A280 usa a absorção de aminoácidos aromáticos, especialmente triptofano e tirosina. Quando há um coeficiente de extinção mássico em mililitros por miligrama por centímetro, a lei de Beer-Lambert fornece a concentração em miligramas por mililitro ao dividir a absorbância corrigida pelo branco pelo coeficiente e pelo caminho óptico. O resultado é então multiplicado pelo fator de diluição da amostra. Os ensaios de Bradford, ácido bicinconínico e Lowry produzem uma cor cuja absorbância varia com a quantidade de proteína. Esses métodos exigem uma curva padrão medida nas mesmas condições das amostras desconhecidas. A calculadora usa uma equação linear em que a absorbância é a inclinação vezes a concentração mais o intercepto. Ela isola a concentração subtraindo o intercepto, dividindo pela inclinação e aplicando o fator de diluição. Insira a inclinação e o intercepto da regressão em unidades que produzam miligramas por mililitro. Se os padrões foram preparados em outra unidade, converta o resultado ou os valores de calibração de forma consistente. Uma quantificação confiável depende da qualidade experimental, não apenas da aritmética. Faça o branco com o mesmo tampão e reagentes, use cubetas ou placas limpas e compatíveis e meça dentro da faixa validada do ensaio. Turbidez, ácidos nucleicos, detergentes, agentes redutores, quelantes, lipídios e componentes do tampão que absorvem intensamente podem causar viés. A resposta colorimétrica também varia entre proteínas. Um padrão semelhante à amostra costuma melhorar a comparabilidade, enquanto réplicas dos padrões e amostras revelam variações de pipetagem ou do instrumento. O caminho óptico da microplaca geralmente não é de um centímetro, a menos que o leitor o corrija; para A280, use o caminho efetivo ou corrigido do instrumento. O coeficiente de extinção deve corresponder à proteína, ao comprimento de onda e à convenção adotada. Um coeficiente molar não pode ser inserido diretamente em um campo de coeficiente mássico. Examine os resíduos e evite extrapolar muito além da curva padrão. Dilua amostras concentradas e meça novamente, em vez de confiar na absorbância fora da faixa linear. A ferramenta executa o cálculo indicado, mas não valida preparo de amostras, qualidade da calibração, compatibilidade do ensaio ou desempenho do instrumento. Registre leituras brutas, brancos, padrões, etapas de diluição e unidades para manter a rastreabilidade da concentração.