DNA 濃度計算機

核酸は芳香族塩基を持つため、260 ナノメートル付近の紫外光を強く吸収します。分光光度計でこの吸光度を測定し、ベール・ランベルトの法則で濃度と結び付けます。この計算機は二本鎖 DNA、一本鎖 DNA、RNA に使われる一般的な換算係数を適用し、希釈倍率と試料体積を掛けて濃度と回収総質量を示します。 通常、A260 が 1.0 のとき、二本鎖 DNA は 50 マイクログラム毎ミリリットル、一本鎖 DNA は 33 マイクログラム毎ミリリットル、RNA は 40 マイクログラム毎ミリリットルと扱います。マイクログラム毎ミリリットルとナノグラム毎マイクロリットルは数値が等しいため、表示濃度に追加の倍率換算は不要です。希釈して測定した場合は希釈倍率を掛けます。例えば十倍希釈後の A260 が 0.5 の二本鎖 DNA は、元の試料で 250 ナノグラム毎マイクロリットルです。 正確な結果には、適切なブランク補正、清潔な光学面、装置の直線範囲内の測定値が必要です。塩、pH、その他の成分がベースラインに影響するため、試料と同じ緩衝液でブランクを測定してください。試料は穏やかに混ぜ、気泡を避けます。吸光度が高すぎる場合は希釈して再測定し、全工程を含む希釈倍率を入力します。倍率は元の濃度を測定溶液の濃度で割った値で、未希釈なら一です。 A260 だけでは試料の純度を証明できません。タンパク質、フェノール、グアニジニウム、遊離ヌクレオチド、濁りも紫外測定値に影響します。実験室では A260 と A280、A260 と A230 の比を大まかな純度指標として確認することがあります。DNA が低濃度、または夾雑物が疑われる場合、蛍光色素法の方が高い特異性を得られます。換算係数も近似であり、特殊なオリゴヌクレオチド配列には配列固有の吸光係数が必要になることがあります。 総質量は回収量の計算、濃度調整の計画、後続実験に使える量の判断に利用できます。濃度と試料体積の積なので、試料が均一であることを前提とします。シーケンシング、クローニング、トランスフェクション、定量 PCR などの繊細な用途では、測定法の要件に従い、異なる原理の方法で濃度を確認することも検討してください。このツールは迅速な計画と分かりやすい計算を支援しますが、信頼できる定量には装置の品質と試料調製が不可欠です。