タンパク質濃度計算機

タンパク質濃度は一般に紫外吸光度、または既知の標準試料と比較する比色法で推定します。A280測定は芳香族アミノ酸、特にトリプトファンとチロシンの吸収を利用します。質量吸光係数がミリリットル毎ミリグラム毎センチメートルで得られる場合、ベール・ランベルトの法則により、ブランク補正済み吸光度を係数と光路長で割ると、ミリグラム毎ミリリットルの濃度が求まります。その結果に試料の希釈倍率を掛けます。 Bradford法、ビシンコニン酸法、Lowry法では発色し、その吸光度がタンパク質量に応じて変化します。未知試料と同じ条件で測定した検量線が必要です。この計算機は、吸光度＝傾き×濃度＋切片という一次式を使います。式を変形し、切片を引いて傾きで割り、希釈倍率を適用します。回帰で得た傾きと切片は、計算後の濃度がミリグラム毎ミリリットルになる単位で入力してください。標準試料の濃度単位が異なる場合は、結果または校正値を整合するよう換算してください。 信頼できる定量には計算だけでなく実験の質が重要です。同じ緩衝液と試薬でブランクを取り、清浄で適合するキュベットやプレートを使い、測定法の検証済み範囲内で測定してください。濁り、核酸、界面活性剤、還元剤、キレート剤、脂質、強く吸収する緩衝液成分は結果に偏りを生じさせます。比色法ではタンパク質ごとに応答も異なります。未知試料に近い標準物質を使うと比較しやすくなり、標準と試料を反復測定すると分注や装置のばらつきを把握できます。 マイクロプレートの光路長は、リーダーで補正しない限り通常一センチメートルではありません。A280には装置の実効光路長または補正光路長を使ってください。吸光係数はタンパク質、波長、係数の定義に合っている必要があり、質量吸光係数の欄にモル吸光係数を直接入力することはできません。残差を確認し、検量線から大きく外れた外挿を避けてください。高濃度試料は希釈して再測定し、直線範囲外の吸光度を信用しないでください。このツールは指定の計算のみを行い、試料調製、校正の質、測定法との適合性、装置性能は検証しません。濃度の追跡性を保つため、生の測定値、ブランク、標準試料、希釈手順、単位を記録してください。