細胞希釈計算機
C1V1 = C2V2の関係から原液と希釈液の体積を計算し、目的の細胞濃度に正確に調製します。
細胞の希釈計算
濃度を同じ単位で入力し、必要な最終体積を指定してください。
細胞の希釈計算について
細胞希釈計算機は、指定した最終濃度と体積に調製するために必要な、濃縮細胞懸濁液と希釈液の量を求めます。細胞培養、微生物学、フローサイトメトリー、播種、計数、アッセイの準備でよく使われる計算です。細胞密度を一定に保つと、ウェル、プレート、試料、実施日をまたいだ実験の比較がしやすくなり、体積を慎重に計画することで無駄やピペット操作のミスを減らせます。
計算にはC1V1 = C2V2という保存の関係を使います。C1は測定した開始濃度、V1は分取する原液の体積、C2は目標濃度、V2は必要な最終総体積です。V1は、目標濃度と最終体積の積を開始濃度で割って求めます。希釈液の体積は最終体積から分取する原液の体積を引いた値です。希釈倍率は開始濃度を目標濃度で割った値になります。
濃度の単位は一致させる必要があります。例えば、両方を一ミリリットル当たりの細胞数、一マイクロリットル当たりの細胞数、または別の同じ濃度単位で入力できます。濃度単位は約分で消えるため、原液と希釈液の計算結果には選択した最終体積の単位が使われます。原液1.00 mLと希釈液9.00 mLという結果は、完成後の混合液が10.00 mLになることを意味します。量を測らずに原液を移した後で9.00 mLを加えるという意味ではありません。
正確な計算でも、不正確な開始時の細胞計数は補正できません。採取前に懸濁液を穏やかに、かつ十分に混和し、適切な計数法を使ってください。プロトコルが生細胞を指定する場合は生存率も考慮します。校正された範囲内で無理なく使えるピペットを選んでください。希釈倍率が非常に大きいと、原液量が小さすぎて正確に分取できず、一段階の希釈が実用的でない場合があります。その場合は検証済みの段階希釈を行います。無菌操作を守り、適合する培地や緩衝液を使用し、すべてのチューブにラベルを付け、各段階で十分に混和してから次へ分取してください。別の担当者が調製を再現できるよう、実際の濃度と体積を実験プロトコルに記録します。
細胞希釈の例
| 条件 | 開始濃度から目標濃度へ | 原液と希釈液 |
|---|---|---|
| 培養液の十倍希釈 | 1,000,000から100,000 cells/mL | 1 mLと9 mL |
| 少量のアッセイ | 500,000から50,000 cells/mL | 50 µLと450 µL |
| 播種用の二倍希釈 | 200,000から100,000 cells/mL | 2.5 mLと2.5 mL |
細胞の希釈量を計算する方法
- 開始時の細胞濃度を測定して入力します。
- それより低い目標濃度を同じ単位で入力します。
- 必要な総体積を入力し、単位を選択します。
- 計算し、表示された体積の原液を分取します。
- 表示された体積の希釈液を加え、十分に混和します。
よくある質問
どの式で計算しますか?
希釈中の細胞数の保存を表すC1V1 = C2V2を使います。原液量はC2にV2を掛け、C1で割って求めます。
目標濃度を開始濃度より高くできますか?
いいえ、希釈液を加えて懸濁液を濃縮することはできません。適切な実験方法で細胞を濃縮し、再測定してからこの希釈計算を使ってください。
濃度の単位はそろえる必要がありますか?
はい。正しく単位を約分できるよう、両方の濃度で分母の体積単位と細胞の計数基準をそろえる必要があります。報告単位が異なる場合は、計算前に一方を換算してください。
段階希釈はどのような場合に使いますか?
一段階で分取する量が手元のピペットの信頼できる範囲を下回る場合や、プロトコルで中間標準液が必要な場合に使います。各段階で十分に混和してから次の分取を行ってください。
細胞の生存率は計算に含まれますか?
自動では含まれません。目標が生細胞濃度の場合は、生存率で補正済みの開始濃度を入力してください。結果とともに計数法と生存率の測定法を記録します。