Calculadora de concentración de ADN

Los ácidos nucleicos absorben intensamente luz ultravioleta cerca de 260 nanómetros debido a sus bases aromáticas. Un espectrofotómetro mide esa absorbancia y la ley de Beer-Lambert la relaciona con la concentración. Esta calculadora aplica los factores de conversión habituales para ADN de doble cadena, ADN de cadena sencilla y ARN. Después multiplica por el factor de dilución y el volumen para mostrar la concentración y la masa total recuperada. Por convención, un A260 de 1.0 se considera equivalente a 50 microgramos por mililitro para ADN de doble cadena, 33 microgramos por mililitro para ADN de cadena sencilla o 40 microgramos por mililitro para ARN. Los microgramos por mililitro tienen el mismo valor numérico que los nanogramos por microlitro, por lo que no hace falta otro cambio de escala. Si la lectura corresponde a una dilución, multiplica por su factor. Así, una muestra de ADN de doble cadena con A260 de 0.5 tras diluirla diez veces tiene 250 nanogramos por microlitro en la muestra original. La exactitud depende de un blanco correcto, una superficie óptica limpia y una lectura dentro del rango lineal del instrumento. Usa como blanco el mismo tampón que la muestra, porque las sales, el pH y otros componentes pueden afectar la línea base. Mezcla suavemente y evita burbujas. Si la absorbancia es demasiado alta, diluye, vuelve a medir e introduce el factor completo. Este factor es la concentración original dividida entre la medida; una muestra sin diluir tiene factor uno. A260 por sí sola no demuestra pureza. Proteínas, fenol, guanidinio, nucleótidos libres y turbidez pueden contribuir a la lectura ultravioleta. Los laboratorios suelen examinar las razones A260 a A280 y A260 a A230 como indicadores generales de pureza. Los ensayos con colorantes fluorescentes pueden ser más específicos cuando la concentración de ADN es baja o hay posibles contaminantes. El factor elegido también es aproximado; algunas secuencias de oligonucleótidos requieren coeficientes de extinción específicos. Usa la masa total para calcular recuperación, planificar normalización o saber cuánto material queda para el trabajo posterior. Es simplemente concentración por volumen y supone una muestra homogénea. Antes de aplicaciones sensibles como secuenciación, clonación, transfección o PCR cuantitativa, sigue los requisitos del ensayo y considera confirmar la concentración con un método de principio independiente. Esta herramienta facilita una planificación rápida y cálculos transparentes, pero la calidad del instrumento y la preparación de la muestra siguen siendo esenciales.