Calculadora de concentración de proteínas

La concentración de proteínas suele estimarse por absorbancia ultravioleta o mediante un ensayo colorimétrico comparado con estándares conocidos. La medición A280 utiliza la absorción de aminoácidos aromáticos, especialmente triptófano y tirosina. Cuando se dispone de un coeficiente de extinción másico en mililitros por miligramo por centímetro, la ley de Beer-Lambert permite obtener la concentración en miligramos por mililitro dividiendo la absorbancia corregida por blanco entre el coeficiente y la longitud del trayecto óptico. Después se multiplica por el factor de dilución de la muestra. Los ensayos de Bradford, ácido bicinconínico y Lowry producen un color cuya absorbancia cambia con la cantidad de proteína. Requieren una curva estándar medida en las mismas condiciones que las muestras desconocidas. Esta calculadora usa una ecuación lineal: absorbancia igual a pendiente por concentración más intercepto. La despeja restando el intercepto, dividiendo entre la pendiente y aplicando el factor de dilución. Introduce la pendiente y el intercepto de tu regresión en unidades que den una concentración en miligramos por mililitro. Si los estándares se prepararon en otra unidad, convierte de forma coherente el resultado o los valores de calibración. Una cuantificación fiable depende de la calidad experimental, no solo de la aritmética. Ajusta el blanco con el mismo tampón y reactivos, usa cubetas o placas limpias y compatibles y mide dentro del intervalo validado del ensayo. La turbidez, los ácidos nucleicos, detergentes, agentes reductores, quelantes, lípidos y componentes del tampón con absorción intensa pueden sesgar los resultados. La respuesta colorimétrica también varía entre proteínas. Un estándar similar a la muestra suele mejorar la comparabilidad, mientras que las réplicas de estándares y muestras revelan variaciones de pipeteo o del instrumento. El trayecto óptico de una microplaca no suele ser de un centímetro salvo que el lector lo corrija; para A280 usa el trayecto efectivo o corregido del instrumento. El coeficiente de extinción debe corresponder a la proteína, longitud de onda y convención utilizada: un coeficiente molar no puede introducirse directamente en un campo de coeficiente másico. Revisa los residuos y evita extrapolar muy lejos de la curva estándar. Diluye las muestras concentradas y vuelve a medir en lugar de confiar en absorbancias fuera del intervalo lineal. Esta herramienta realiza el cálculo indicado, pero no valida la preparación de muestras, calidad de calibración, compatibilidad del ensayo ni rendimiento instrumental. Registra lecturas originales, blancos, estándares, pasos de dilución y unidades para mantener la trazabilidad de la concentración.