qPCR 효율 계산기

정량 PCR 효율은 각 증폭 주기 동안 표적 DNA가 얼마나 축적되는지를 나타냅니다. 일반적으로 초기 주형 농도의 밑이 10인 로그값에 대해 Cq 또는 Ct 값을 그린 표준 곡선에서 추정합니다. 이 계산기는 희석, 주기 차이, 증폭 배수 사이의 표준 관계를 사용하여 적합 직선의 음의 기울기를 효율 백분율로 변환합니다. 기울기가 마이너스 3.322에 가까우면 증폭 배수는 두 배이고 효율은 약 100%로, 이상적으로 각 주기마다 표적량이 두 배가 됩니다. 많은 qPCR 작업 절차에서는 90%~110% 효율을 대체로 허용할 수 있는 것으로 봅니다. 이에 해당하는 기울기는 대략 마이너스 3.58~마이너스 3.10입니다. 다만 허용 기준은 실험실에서 검증한 방법, 분석 목적, 장비 지침, 해당 보고 표준을 따라야 합니다. 효율만으로 분석의 신뢰성을 입증할 수는 없습니다. 표준 곡선은 작업 농도 범위를 포함하고 충분한 기술적 반복을 갖추며, 잔차에 체계적인 곡률이 나타나지 않는 높은 선형성을 보여야 합니다. 낮은 효율은 프라이머 불일치, 부적절한 프라이머 설계, 이차 구조, 최적이 아닌 어닐링 조건, 억제 물질, 부정확한 희석, 피펫팅 오류 또는 분석의 선형 응답 범위를 벗어난 농도에서 발생할 수 있습니다. 110%를 넘는 효율은 실제로 매우 효율적인 복제라기보다 비특이적 증폭, 프라이머 이합체, 기준선이나 임계값 문제 또는 희석 계열 오류를 나타내는 경우가 많습니다. 수치 결과를 채택하기 전에 증폭 곡선을 검토하고 해당하는 경우 용융 곡선도 확인하세요. 여기에서 가정한 축 설정과 동일하게 얻은 회귀 기울기를 사용하세요. 세로축은 Cq, 가로축은 초기량의 log10입니다. 축을 바꾸거나 자연로그를 사용하면 이 공식과 호환되지 않는 기울기가 나옵니다. 반올림은 보고되는 효율을 바꿀 수 있으므로 적합 기울기의 유효 숫자를 충분히 유지하세요. 출력은 수학적 변환이며 표준 곡선 상관성, 반복 간 변동, 무주형 대조군, 동적 범위 및 분석 특이성 확인을 대신하지 않습니다.