Calculateur de concentration d'ADN

Les acides nucléiques absorbent fortement les ultraviolets près de 260 nanomètres grâce à leurs bases aromatiques. Un spectrophotomètre mesure cette absorbance, reliée à la concentration par la loi de Beer-Lambert. Ce calculateur applique les facteurs usuels de laboratoire pour l'ADN double brin, l'ADN simple brin et l'ARN. Il multiplie ensuite par le facteur de dilution et le volume pour indiquer la concentration et la masse totale récupérée. Par convention, une A260 de 1.0 correspond à 50 microgrammes par millilitre pour l'ADN double brin, 33 microgrammes par millilitre pour l'ADN simple brin ou 40 microgrammes par millilitre pour l'ARN. Les microgrammes par millilitre ont la même valeur numérique que les nanogrammes par microlitre : aucun changement d'échelle supplémentaire n'est nécessaire. Pour une lecture après dilution, multipliez par le facteur de dilution. Ainsi, un ADN double brin dont l'A260 est de 0.5 après dilution au dixième a une concentration initiale de 250 nanogrammes par microlitre. L'exactitude exige un blanc correct, une surface optique propre et une lecture dans la plage linéaire de l'appareil. Faites le blanc avec le même tampon que l'échantillon, car sels, pH et autres composants peuvent modifier la ligne de base. Mélangez doucement et évitez les bulles. Si l'absorbance est trop élevée, diluez, mesurez à nouveau et saisissez le facteur complet. Celui-ci correspond à la concentration initiale divisée par celle de la solution mesurée ; sans dilution, il vaut un. L'A260 seule ne prouve pas la pureté. Protéines, phénol, guanidinium, nucléotides libres et turbidité peuvent contribuer au signal ultraviolet. Les laboratoires examinent souvent les rapports A260 sur A280 et A260 sur A230 comme indicateurs généraux de pureté. Les dosages par colorants fluorescents peuvent être plus spécifiques à faible concentration d'ADN ou en présence probable de contaminants. Le facteur de conversion reste approximatif ; des séquences inhabituelles d'oligonucléotides peuvent nécessiter des coefficients d'extinction propres à la séquence. Utilisez la masse totale pour calculer la récupération, prévoir une normalisation ou connaître le matériel disponible pour les étapes suivantes. C'est simplement la concentration multipliée par le volume, ce qui suppose un échantillon homogène. Avant des applications sensibles comme le séquençage, le clonage, la transfection ou la PCR quantitative, respectez les exigences du protocole et envisagez une confirmation par une méthode fondée sur un autre principe. L'outil facilite une planification rapide et des calculs explicites, mais la qualité instrumentale et la préparation restent essentielles à une quantification fiable.