Calculateur de concentration en protéines

La concentration en protéines est généralement estimée par absorbance ultraviolette ou par dosage colorimétrique comparé à des étalons connus. La mesure A280 exploite l'absorption des acides aminés aromatiques, notamment le tryptophane et la tyrosine. Avec un coefficient d'extinction massique en millilitres par milligramme par centimètre, la loi de Beer-Lambert donne la concentration en milligrammes par millilitre en divisant l'absorbance corrigée du blanc par le coefficient et le trajet optique. Le résultat est ensuite multiplié par le facteur de dilution. Les dosages de Bradford, à l'acide bicinchoninique et de Lowry produisent une coloration dont l'absorbance varie avec la quantité de protéines. Ils nécessitent une courbe étalon mesurée dans les mêmes conditions que les échantillons inconnus. Ce calculateur utilise une équation linéaire : absorbance égale pente multipliée par concentration plus ordonnée à l'origine. Il la réarrange en soustrayant l'ordonnée à l'origine, en divisant par la pente et en appliquant la dilution. Saisissez les paramètres de votre régression dans des unités donnant une concentration en milligrammes par millilitre. Si les étalons utilisent une autre unité, convertissez le résultat ou les valeurs d'étalonnage de façon cohérente. Une quantification fiable dépend de la qualité expérimentale, pas seulement du calcul. Faites le blanc avec le même tampon et les mêmes réactifs, utilisez des cuves ou plaques propres et compatibles et mesurez dans la plage validée du dosage. Turbidité, acides nucléiques, détergents, agents réducteurs, chélateurs, lipides et composants du tampon fortement absorbants peuvent biaiser les résultats. La réponse colorimétrique varie aussi selon la protéine. Un étalon proche de l'échantillon améliore généralement la comparabilité ; les répétitions des étalons et échantillons révèlent les variations de pipetage ou de l'instrument. Le trajet optique d'une microplaque n'est généralement pas d'un centimètre, sauf correction par le lecteur. Pour A280, utilisez le trajet effectif ou corrigé de l'appareil. Le coefficient d'extinction doit correspondre à la protéine, à la longueur d'onde et à la convention employée ; un coefficient molaire ne peut pas être saisi directement dans un champ massique. Examinez les résidus et évitez d'extrapoler loin de la courbe étalon. Diluez les échantillons concentrés et mesurez à nouveau plutôt que de vous fier à une absorbance hors de la plage linéaire. Cet outil effectue le calcul demandé, mais ne valide ni préparation, ni qualité d'étalonnage, ni compatibilité du dosage, ni performances instrumentales. Consignez les lectures brutes, blancs, étalons, étapes de dilution et unités pour assurer la traçabilité de la concentration.