DNA拷貝數計算機

DNA拷貝數將量測的質量換算為實際分子數量的估計值。分子生物學流程常需要此換算，因為儀器回報濃度或質量，而反應取決於模板分子的數量。定量PCR標準品、數位PCR規劃、選殖、定序文庫、轉染實驗與合成對照，都可運用這種透明的質量至分子數估算。 計算將雙股DNA每個鹼基對的平均莫耳質量視為660克每莫耳。片段的鹼基對長度乘以660，即得到一個DNA分子的近似莫耳質量。輸入質量先換成克，除以分子量取得莫耳數，再乘以精確的亞佛加厥常數6.02214076乘十的二十三次方，估算分子數。依此模型，十奈克、長度5,000鹼基對的質體約有1.825十億個分子。 長度與拷貝數成反比。在相同質量下，1,000鹼基對擴增子的分子數是5,000鹼基對質體的五倍，因為每個分子的質量約為後者的五分之一。質量則成正比：質量加倍，估計拷貝數也加倍。請確認輸入長度代表要計數的完整分子。環狀質體應使用包含載體與插入片段的總長度，而非只有擴增標的長度。 每鹼基對660克每莫耳是平均值，因此答案屬於估算。精確分子量會隨序列、末端、修飾及是否單股而略有變化。本計算機適用於雙股DNA。濃度量測也有不確定性，污染物可能使吸光值法高估DNA質量。螢光分析可能提高專一性，而製備低拷貝標準品時，準確移液與正確稀釋同樣重要。 若要將濃度換成每微升拷貝數，請輸入一微升中所含的DNA質量。例如每微升十奈克的濃度，輸入十奈克後，輸出即為每微升拷貝數。只有需要加入的分子總數時，才再乘以反應體積。製備標準品應使用低吸附耗材、充分混勻、適當載體並重複製備稀釋液，因為極低濃度時吸附與移液誤差的影響變大。計算值提供合理的理論起點，下游定量的可靠性則由實驗品質管制決定。