重懸計算器
依已知的奈莫耳量與目標微莫耳濃度,計算重懸所需的溶劑體積。
寡核苷酸與化合物重懸
輸入乾燥材料的量(奈莫耳),以及所需儲備液濃度(微莫耳每公升)。
關於重懸計算
重懸是將適當溶劑加入已知量的乾燥材料,配製成液態儲備液。在分子生物學與化學實驗室中,合成寡核苷酸、引子、探針、胜肽及小分子化合物通常以乾燥沉澱或薄膜形式交付,並以奈莫耳標示物質的量。依所需濃度決定溶劑體積,可讓後續移液與稀釋更方便。
本計算器採用濃度等於物質的量除以體積的關係。當物質的量以奈莫耳輸入、目標濃度以微莫耳每公升輸入時,實驗室常用換算為:體積(微升)= 物質的量(奈莫耳)× 1,000 ÷ 濃度(微莫耳每公升)。係數1,000用來換算公制前綴。例如,將25 nmol配製為100 µM,需要250 µL溶劑。結果是最終溶液體積;當乾燥材料所占體積可忽略時,通常可近似為加入的溶劑體積。
目標濃度應依後續實驗流程選擇。DNA引子常用100 µM儲備液,因為簡單十倍稀釋即可得到10 µM工作液,但合適數值仍取決於分析設計、穩定性、溶解度及實驗室流程。計算體積太小時,可能難以準確移液。此時應配製較低濃度,或採取分段稀釋,而非使用低於現有移液器可靠量程的體積。
選擇溶劑與算術同樣重要。寡核苷酸可能建議使用不含核酸酶的水或適當緩衝液,其他化合物則可能需要特定水性緩衝液或有機溶劑。請遵循供應商的處理說明,包括pH、混合、溫度、避光、保存與凍融建議。配製前,先確認材料可在所選目標濃度下溶解。
加入溶劑後,採用適合材料的方法混合,並給予足夠時間完全溶解。短暫離心可收集管壁上的液體。請在儲備液上標示名稱、濃度、溶劑、配製日期及保存條件。計算假設供應商標示的奈莫耳量正確,且所有材料均已溶解。重要定量實驗還應考慮純度、含水量、鹽類形式、回收率,以及實驗方法建議的濃度確認。
重懸範例
以下範例將奈莫耳量與目標微莫耳濃度直接換算為微升體積。
| 乾燥材料的量與目標濃度 | 加入溶劑 | 計算說明 |
|---|---|---|
| 25 nmol,目標100 µM | 250 µL | 將25乘以1,000,再除以100。 |
| 7.5 nmol,目標50 µM | 150 µL | 目標濃度越低,需要的溶劑體積越大。 |
| 40 nmol,目標200 µM | 200 µL | 較高濃度可讓最終儲備液體積較小。 |
如何計算重懸體積
- 從供應商標籤或證明文件查找乾燥材料的奈莫耳量。
- 依後續實驗流程選擇合適的目標儲備液微莫耳濃度。
- 依顯示單位輸入兩個正值。
- 選取「計算重懸體積」,記下以微升表示的溶劑體積。
- 配製前確認溶劑相容性及實際移液精度。
重懸計算器常見問題
公式為什麼包含係數1,000?
此係數將奈莫耳量與微莫耳濃度輸入值換算成微升體積,直接源自莫耳、奈莫耳、公升與微升之間的公制關係。
應該使用什麼溶劑?
使用材料供應商或實驗室流程建議的溶劑。溶解度、穩定性、pH、核酸酶控制及後續實驗相容性,都可能影響選擇。
100 µM一定是最佳儲備液濃度嗎?
不一定,雖然100 µM常用於寡核苷酸儲備液。請選擇能溶解、保持穩定且方便配製所需工作稀釋液的濃度。
計算出的體積太小,無法移液怎麼辦?
降低目標濃度以增加溶劑體積,或使用適當的分段配製方法。不要假設移液器在低於規定工作量程時仍能保持準確。
乾燥材料會改變最終體積嗎?
計算假設其體積貢獻可忽略,對少量乾燥材料通常合理。更精確的配製應定容至指定最終體積,而不是直接加入相同體積的溶劑。