DNA拷贝数计算器

DNA拷贝数将测得的质量换算为实际分子数量的估计值。分子生物学流程常需要这种换算，因为仪器报告浓度或质量，而反应取决于模板分子的数量。定量PCR标准品、数字PCR规划、克隆、测序文库、转染实验及合成对照，都可利用这种透明的质量到分子数估算。 计算将双链DNA每个碱基对的平均摩尔质量视为660克每摩尔。片段的碱基对长度乘以660，得到一个DNA分子的近似摩尔质量。输入质量先换算为克，再除以该分子量得到摩尔数，最后乘以精确的阿伏伽德罗常数6.02214076乘十的二十三次方，估算分子数。在此模型下，十纳克、长度为5,000碱基对的质粒约含1.825十亿个分子。 长度与拷贝数成反比。同样质量下，1,000碱基对扩增子的分子数是5,000碱基对质粒的五倍，因为每个分子的质量约为后者的五分之一。质量与拷贝数成正比：质量加倍，估算拷贝数也加倍。请确保输入长度代表要计数的完整分子。环状质粒应使用包括载体和插入片段的总长度，而非仅扩增靶标的长度。 由于每碱基对660克每摩尔是平均值，结果属于估算。精确分子量会随序列、末端、修饰及是否单链而略有变化。本计算器用于双链DNA。浓度测量也存在不确定性，污染物可使吸光度法高估DNA质量。荧光测定可能提高特异性；配制低拷贝标准品时，准确移液和规范稀释同样重要。 若要将浓度换算为每微升拷贝数，请输入一微升中所含的DNA质量。例如浓度为每微升十纳克时，输入十纳克，输出即为每微升拷贝数。仅在需要加入的分子总数时，再乘以反应体积。制备标准品应使用低吸附耗材、充分混匀、适当载体并平行配制稀释液，因为极低浓度下吸附和移液误差会变得重要。计算值提供合理的理论起点，下游定量的可靠性仍由实验质量控制决定。