重悬计算器
根据已知的纳摩尔量和目标微摩尔浓度,计算重悬所需的溶剂体积。
寡核苷酸与化合物重悬
输入干燥材料的量(纳摩尔)及所需储备液浓度(微摩尔每升)。
关于重悬计算
重悬是向定量的干燥材料中加入合适的溶剂,将其配制为液体储备液。在分子生物学和化学实验室中,合成的寡核苷酸、引物、探针、肽及小分子化合物通常以干燥沉淀或薄膜形式交付,并以纳摩尔标注物质的量。根据所需浓度选择溶剂体积,可简化后续移液和稀释。
本计算器使用浓度等于物质的量除以体积的关系。输入纳摩尔量和目标微摩尔浓度时,便捷的实验室换算公式为:体积(微升)= 物质的量(纳摩尔)× 1,000 ÷ 浓度(微摩尔每升)。系数1,000用于协调公制前缀。例如,将25 nmol配制成100 µM溶液,需要250 µL溶剂。结果表示最终溶液体积;当干燥材料的体积贡献可忽略时,通常可近似视为加入的溶剂体积。
目标浓度应根据后续实验流程选择。DNA引物常用100 µM储备液,因为简单的十倍稀释即可得到10 µM工作液,但合适的浓度仍取决于实验设计、稳定性、溶解度和实验室方案。计算体积过小时,可能难以准确移取。此时应配制较低浓度的溶液,或采用分步稀释,而不要依赖低于现有移液器可靠量程的体积。
溶剂选择与计算同样重要。寡核苷酸可能推荐使用无核酸酶水或合适的缓冲液,其他化合物则可能需要特定水性缓冲液或有机溶剂。请遵循供应商的操作说明,包括pH、混匀、温度、避光、储存和冻融要求。配制前,确认材料在所选目标浓度下可溶。
加入溶剂后,采用适合材料的方法混匀,并留出足够时间使其完全溶解。短暂离心可收集管壁液体。为储备液标注名称、浓度、溶剂、配制日期和储存条件。计算假设供应商标注的纳摩尔量准确,且所有材料均已溶解。对于关键定量实验,还应考虑纯度、含水量、盐形式、回收率,以及实验方法建议的浓度验证。
重悬示例
以下示例将纳摩尔量和目标微摩尔浓度直接换算为微升体积。
| 干燥材料的量与目标浓度 | 加入溶剂 | 计算说明 |
|---|---|---|
| 25 nmol,目标100 µM | 250 µL | 将25乘以1,000,再除以100。 |
| 7.5 nmol,目标50 µM | 150 µL | 目标浓度越低,所需溶剂体积越大。 |
| 40 nmol,目标200 µM | 200 µL | 较高浓度可使最终储备液体积较小。 |
如何计算重悬体积
- 在供应商标签或证书上查找干燥材料的纳摩尔量。
- 根据后续实验方案选择合适的目标储备液微摩尔浓度。
- 按显示的单位输入两个正值。
- 点击“计算重悬体积”,记录以微升表示的溶剂体积。
- 配制前确认溶剂相容性和实际移液精度。
重悬计算器常见问题
公式为什么包含系数1,000?
该系数将纳摩尔量和微摩尔浓度换算为微升体积,直接来源于摩尔、纳摩尔、升和微升之间的公制关系。
应该使用什么溶剂?
使用材料供应商或实验室方案推荐的溶剂。溶解度、稳定性、pH、核酸酶控制及后续实验相容性都会影响正确选择。
100 µM总是最佳储备液浓度吗?
不是,尽管100 µM是寡核苷酸储备液的常用浓度。应选择能充分溶解、保持稳定且便于配制所需工作液的浓度。
计算体积太小,无法移取怎么办?
降低目标浓度以增加溶剂体积,或采用合适的分步配制方法。不要假定移液器在低于其规定工作量程时仍然准确。
干燥材料会改变最终体积吗?
计算将其体积贡献视为可忽略,这通常适用于少量干燥材料。要求更精确时,应定容至指定最终体积,而不是简单加入等体积的溶剂。