qPCR效率计算器

定量PCR效率描述目标DNA在每个扩增循环中的累积程度。通常将Cq或Ct值相对于起始模板浓度的以10为底的对数作图，建立标准曲线来估算。本计算器依据稀释倍数、循环差与扩增倍数之间的标准关系，将拟合直线的负斜率换算为效率百分比。斜率接近负3.322时，扩增倍数为二，效率约为100%，即理想情况下每个循环的目标量翻倍。 许多qPCR工作流程认为90%至110%的效率大体可接受，对应斜率约为负3.58至负3.10。但验收标准仍应遵循实验室已验证的方法、检测目的、仪器指南及适用报告规范。仅凭效率不足以证明检测可靠。标准曲线还应覆盖工作浓度范围、包含足够的技术重复，并表现出良好的线性，残差不应呈现系统性弯曲。 效率不佳可能源于引物不匹配、引物设计不良、二级结构、退火条件不理想、抑制物、稀释不准确、移液误差，或浓度超出检测的线性响应范围。效率高于110%通常提示非特异性扩增、引物二聚体、基线或阈值问题、系列稀释误差，而非真正的超高效复制。在接受数值结果前，应检查扩增曲线，并在适用时检查熔解曲线。 请使用与此处坐标约定一致的回归斜率：纵轴为Cq，横轴为起始量的log10。交换坐标轴或使用自然对数得到的斜率不适用于该公式。请保留拟合斜率足够的有效数字，因为舍入可能改变报告的效率。输出只是数学换算，不能替代对标准曲线相关性、重复间变异、无模板对照、动态范围及检测特异性的检查。